Estandarización de una PCR convencional para la detección de Haemophilus influenzae en muestras nasofaríngeas de niños menores de 5 años

Abstract

El presente estudio tuvo como objetivo estandarizar una PCR convencional para la detección de Haemophilus influenzae en muestras nasofaríngeas de niños menores de cinco años, así como determinar el límite de detección de la PCR y su sensibilidad empleando muestras positivas a H. influenzae por microbiología y utilizando otros patógenos nasofaríngeos como S. pneumoniae, S. aureus y N. meningitidis. Las condiciones adecuadas de este PCR fueron desarrolladas utilizando el kit PCR Promega® a concentraciones optimas de 1,5 mM en MgCl2 y 0.2 mM para dNTP. Se utilizó los primers dirigidos al gen hpd con una concentración de 7,5 mM y un rango de concentración de ADN de 0.183-183 ng por reacción. La temperatura optima de hibridación fue de 60°C con 40 ciclos. El límite de detección fue 3.29 x104 UFC/mL equivalente a 0,183 ng de ADN. Asimismo, se evaluó diez muestras con diagnóstico previo de H. influenzae por microbiología amplificando en el gen hpd que indica la positividad para esta bacteria además este PCR solo amplificó en H. influenzae al evaluar su sensibilidad diagnóstica con otros patógenos nasofaríngeos. Estos resultados abordan el desarrollo de una PCR convencional con la finalidad de ser una prueba de rápido diagnóstico y bajo costo para detectar H. influenzae en muestras nasofaríngeas de niños colonizados como prevención en el desarrollo de enfermedad invasiva y con ello futuros estudios de vigilancia epidemiológica sobre esta bacteria.